Atlas de histología vegetal y animal
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Ténicas histológicas

PROCESO HISTOLÓGICO
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Denominamos proceso histológico a una serie de métodos y técnicas utilizados para poder estudiar las características morfológicas y moleculares de los tejidos. Hay diversos caminos para estudiar los tejidos, es decir, series de técnicas que se utilizarán dependiendo de qué característica deseemos observar. En el siguiente esquema se muestran los métodos y técnicas comúnmente empleados para el procesamiento de los tejidos. Sin embargo, hay que tener en cuenta que existen muchas variantes a estos "caminos" y su elección dependerá del resultado final que queramos obtener.

Proceso histológico
Esquema del proceso histológico.

El proceso histológico comienza con la obtención del tejido objeto de estudio. En el caso de los tejidos vegetales se toman muestras de los distintos órganos que componen el cuerpo de la planta, mientras que para los tejidos animales podemos optar por dos opciones: coger una porción de dicho tejido o procesar una parte, órgano o parte corporal, o el animal completo. En cualquier caso las muestras son habitualmente fijadas con unos soluciones líquidas que contienen unas sustancias denominadas fijadores, las cuales mantienen las estructuras celulares y moleculares en sus posiciones iniciales durante el procesamiento posterior. También podemos fijar las moléculas de los tejidos por congelación rápida. Fijar un tejido es como si hiciésemos una fotografía del tejido que se mantendrá hasta su observación. Sin embargo, el uso de fijadores o medios de inclusión afectan a veces las características tisulares que queremos observar y por tanto tenemos que recurrir a la congelación para endurecer el tejido para después poder obtener secciones del mismo.

Normalmente, tras la fijación se procede a incluir el tejido para posteriormente obtener secciones. Cuanto más delgada queramos que sea nuestra sección más tenemos que endurecer nuestra muestra. Esto se consigue embebiendo el tejido con sustancias líquidas que posteriormente polimerizarán (resinas) o se volverán consistentes (ceras). También se puede conseguir el mismo efecto mediante congelación rápida. Cortes más gruesos de 40 µm se pueden cortar sin necesidad de inclusión usando el vibratomo. Los medios de inclusión son normalmente no hidrosolubles por lo que tenemos que sustituir el agua de los tejidos por solventes orgánicos liposolubles y posteriormente añadir el medio de inclusión.

Tras la inclusión o la congelación se procede a cortar los tejidos. Existen diferentes aparatos de corte que permiten conseguir secciones ultrafinas (del orden de nanometros), semifinas (de 0.5 a 2 µm), finas (entre unas 3 y 10 µm) y gruesos (mayores a 10 µm). Estas secciones hay que procesarlas para poder observarlas, aunque ciertos tipos de microscopía, por ejemplo con contraste de fase, permiten observar tejidos sin teñir. Normalmente las secciones se tiñen con colorantes que son hidrosolubles, por lo que hay que eliminar el medio de inclusión para que los colorantes pueden unirse al tejido. Las secciones, secciones ultrafinas, que se observan con el microscopio electrónico se pueden contrastar con metales pesados, opacos a los electrones, sin eliminar la resina.

Los tejidos procesados se observan con los microscopios. Existen dos tipos básicos de microscopios: electrónico y óptico. Los primeros permiten un gran poder de resolución, pudiéndose observar características ultraestructurales, mientras que los segundos, con menor poder de resolución, ofrecen una gran versatilidad en cuanto a modos de observar los tejidos : fluorescencia, contraste de fase, polarización o contraste de interferencia diferencial.

Como dijimos al comienzo existen múltiples variaciones sobre este esquema general. Por ejemplo, se pueden observar tejidos con el microscopio electrónico de barrido sin necesidad de incluir ni cortar, pero sólo observaremos superficies. En las siguientes páginas veremos con cierto detalle algunas de las técnicas más empleadas para la observación de los tejidos.

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Actualizado: 27-04-2009